Densidade e caracterização de bactérias diazotróficas associativas oriundas de diferentes sistemas de uso da terra na Região amazônica

Abstract

O objetivo deste trabalho foi avaliar a densidade de bactérias diazotróficas provenientes de diferentes sistemas de uso da terra (SUT) na região amazônica e caracterizar alguns isolados. Trinta amostras de solos coletadas de diferentes SUT na região amazônica foram utilizadas (Floresta, Capoeira Velha, Capoeira Nova, Agrofloresta, Roça e Pastagem). A população de diazotróficos foi quantificada pela técnica do número mais provável (NMP) em meios semi- sólidos com diferentes composições lívres de nitrogênio (JNFb, NFb, LGI e Fam). Para comparação foram incluídas estirpes tipo de espécies de Azospirillum, Burkholderia e Herbaspirillum A caracterização fenotípica dos isolados foi avaliada através de caracterização culturaL caracterização celular, análise de proteínas totais SDS-PAGE e atividade da nitrogenase. A caracterização genotípica foi realizada através do sequenciamento parcial do 16S rDNA. Não foi observado crescimento bacteríano típico de diazotróficos em meio JNFb. A densidade foi variável entre os SUT, mas em meio LGI e Fam houve uma tendência de maiores valores no SUT Pastagem Foram isoladas 22 bactérias com elevada diversidade fenotípica. Dos 22 isolados, 11 apresentaram atividade da nitrogenase. Dezessete isolados foram seqüenciados, destes 14 apresentaram similaridade abaixo de 100% com espécies fixadoras de nitrogênio. Houve predominância de espécies do gênero Burkholderia e espécies pertencentes à família Enterobacteriaceae. A maioria das espécies de Burkholderia foi encontrada no SUT Pastagem Existem, entre os isolados, seqüências desconhecidas que podem representar novas espécies.

Associative diazotrophic bacteria are among the important functional groups of microorganisms that live in soils. These bacteria contribute to plant growth mainly through biological Nz ñxation. The aim of this Work Was to evaluate the density of non-symbiotic diazotrophic bacteria in soils under diverse land use systems (LUS) in Amazonia and to characterize some isolates. Thirty soil samples at different LUS in Amazon region Were used (Forest, Young second forest, Old second forest, Agroforestry, Crop, and Pasture). The density Was evaluated by most probable numbers (MPN) in nitrogen free media (JNFb, NFb, LGI and Fam) With different compositions. The phenotypic characterization of 22 isolates Were evaluated through cultural characteristics on potato and GNA media, cell morphology in optic microscope, protein proñles by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), as Well as nitrogenase activity by acetylene reduction assay (ARA), compared to type and reference strains of Azospirillum, Herbaspirillum and Burkholderia species. Partial nucleotíde sequences of 16S rDNA of isolates Were determined. No growth in JNFb was observed. The density Was Variable among the LUS, but in LGI and Fam media there were a trend of larger numbers in Pasture. Twenty-two isolates Were obtained, With a great phenotypic diversity. From 22 isolates, 11 presented nitrogenase activity. Seventeen isolates Were sequenced, from these 14 presented similarity below 100% to known nitrogen ñxing species. Among them, there is a predominance of Burkholderia species and enteric bacteríaL Burkholderia species Were found mainly in LUS Pasture. There are among the isolates unknown sequences that can represent new species.